O Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA) tem discutido a obrigatoriedade da realização de espermocultura em sêmen industrializado não somente para garantia da biossegurança mas também por falhas na fertilização in vitro pela contaminação dos ovócitos com bactérias ubiquitárias e oportunistas da microbiota prepucial. A técnica quantitativa de Pour Plate, preconizada pela Organização Internacional de Epizootias, é operacionalmente difícil e de custo elevado para a rotina em centrais de inseminação artificial (CIAs). Desse modo, avaliou-se a técnica de contagem de bactérias viáveis por superfície (CBVS) em UFC/mL de sêmen industrializado de touros de CIAs, comparando-a à técnica de Pour Plate, com intuito de validação. Foram empregadas palhetas de sêmen de touros do Projeto Hungria do MAPA. A partir da diluição seriada de 10-1 a 10-5 do sêmem, foram empregadas, paralelamente, as técnicas de Pour Plate e CBVS. A média ou mediana de UFC/mL obtida em cada diluição foi comparada entre as técnicas, e não foram observadas diferenças estatísticas entre as duas técnicas quanto à quantificação de bactérias em UFC/mL, sugerindo a possibilidade de substituição da técnica de Pour Plate pela de CBVS, com vantagens de praticidade e menor custo.

The Brazilian Ministry of Agriculture (MAPA) has discussed the mandatory culture of industrialized semen, both to ensure biosefety, and to prevent in vitro fertilization problems caused by oocyte contamination with ubiquitous and opportunistic bacteria from preputial microbiota. Pour plate, a quantitative technique recommended by the World Organization for Animal Health (OIE), is operationally difficult and costly for routine analysis in Artificial Insemination Centers (AICs). The objectives of this study were to evaluate and validate viable superficial bacteria counts (VSBC), in CFU/mL, compared with pour plate counts, in industrialized bull semen samples from AICs. Semen straws from Projeto Hungria - MAPA bulls were used. VSBC and pour plate were carried out in parallel in serial dilutions of the samples, from 10-1 to 10-5. CFU/mL means or medians recorded in each dilution and technique were compared, and no statistical differences were observed between the two techniques regarding the quantification of bacteria in CFU/mL, suggesting that it may be possible to replace pour plate for CBSV, a cheaper and more practical technique.

RESUMO A infecção por Leptospira spp. sorovar Hardjo é endêmica nos rebanhos bovinos brasileiros. A introdução de animal infectado em rebanhos livres, acesso a aguadas e pastejo consorciado entre ovinos e bovinos têm sido apontados como os principais fatores de risco. Objetivou-se investigar quais fatores de risco envolvem a infecção pelo sorovar Hardjo em rebanhos exclusivos de ovinos e consorciados com bovinos nas condições criatórias extensivas e semi-intensivas adotadas na região de Sorocaba, São Paulo. Amostras sorológicas de oito rebanhos, não vacinados contra leptospirose: cinco com criação consorciada entre ovinos e bovinos e três exclusivas de ovinos foram examinadas pela reação de soroaglutinação microscópica. Um questionário epidemiológico foi aplicado considerando-se manejos sanitário e zootécnico e condições ambientais. Todos os rebanhos apresentaram animais reatores para Leptospira spp.: 51,16% (22/43) dos animais consorciados e 70,83% (17/24) dos ovinos (p = 0,191), mas apenas os rebanhos consorciados apresentaram pelo menos um animal reator ao sorovar Hardjo. A condição consorciada foi a única com significância para a presença sorológica do sorovar Hardjo (p = 0,018). Quando avaliado o total de ovinos em condições criatórias exclusivas frente aos ovinos consorciados com bovinos, o risco associado à consorciação foi significante para a presença do sorovar Hardjo (p = 0,005). Conclui-se que o sorovar Hardjo estava relacionado à presença de bovinos e independente de outros fatores de risco.

ABSTRACT Leptospira spp. serovar Hardjo infection is endemic in Brazilian cattle herds. The main risk factors for infection by serovar Hardjo are introduction of infected bovine into free herds, access to surface water and grazing sheep and cattle together. The present study investigated the risk factors involved in serovar Hardjo infection in sheep-only herds and in sheep grazing together with cattle herds in the region of Sorocaba, state of São Paulo, Brazil. Serum samples from eight herds not vaccinated against leptospirosis, five consisting of cattle and sheep and three with sheep only, were examined by microscopic agglutination test. An epidemiological questionnaire was applied taking into account sanitary and zootechnical management and environmental conditions. All herds showed reactors to Leptospira spp.: 51.16% (22/43) in cattle-sheep herds and 70.83% (17/24) in sheep-only herds (p = 0.191); but only the cattle-sheep herds showed at least one reactor to the serovar Hardjo, which was absent in all the sheep-only herds. Grazing cattle and sheep together was the only significant risk factor for serovar Hardjo infection (p = 0.018). When the total of sheep raised in sheep-only herds was compared with those raised with cattle, the risk associated with grazing these species together was significant for the presence of serovar Hardjo (p = 0.005). It was concluded that serovar Hardjo in sheep was directly related to the presence of bovines, regardless of other risk factors.

RESUMO A prevalência de anticorpos anti-Neospora caninum foi avaliada em 1104 vacas de 118 fazendas da região oeste do Estado de São Paulo, Brasil, usando a Reação de Imunofluorescência Indireta. Sessenta e cinco (55,0%; IC 95%: 46,0-63,8%) fazendas apresentaram pelo menos um animal soropositivo. Prevalência acima de 10% foi observada em 33 fazendas (28,0%; IC 95%: 20,4-36,5%), e acima de 20% em 18 (15,2%; IC 95%: 9,5-22,6%). A prevalência de animais foi de 10,9%, sendo 120 vacas positivas (RIFI ? 1:100). Observou-se associação significativa entre a presença de animais positivos e fazendas com produção leiteira acima de 50 litros por dia. Infecção causada por N. caninum ocorre na região oeste do Estado de São Paulo, mesmo não tendo sido observada relação entre animais soropositivos e práticas de manejo, nas fazendas com alta produção leiteira foram observadas as maiores prevalências de infecção.

ABSTRACT The prevalence of anti-Neospora caninum antibodies was evaluated in 1104 cows from 118 farms in the Western region of São Paulo State, Brazil, using indirect immunofluorescence antibody assay. Sixty-five (55.0%; CI 95%: 46.0-63.8%) farms showed at least one seropositive animal. Prevalence over 10% was observed in 33 farms (28.0%; CI 95%: 20.4-36.5%), and over 20% in 18 farms (15.2%; CI 95%: 9.5-22.6%). Prevalence of animals showed 120 (10.9%) positive females (IFAT ? 1:100). The positivity in the farms showed significant association with farms producing more than 50 liters per day. Infection caused by the protozoan N. caninum occurs in the Western region of the state of São Paulo, and although no differences were observed either in relation to the production type or management practices, greater milk yield was related to greater prevalence of infection.

Foram analisadas 80 amostras de sobrecoxas de frangos de corte resfriados provenientes de feiras livres e hipermercados do município de São Paulo, SP. Treze estirpes de Campylobacter spp. foram isoladas em 10 (12,5%) sobrecoxas, sendo cinco amostras originárias de feiras livres e cinco de hipermercados. Onze estirpes foram identificadas como Campylobacter jejuni e duas como Campylobacter coli. As 11 estirpes foram confirmadas como C. jejuni pela PCR do gene da hipuricase (hip), e destas, quatro (36,4%) apresentaram os três genes (cdtA, cdtB e cdtC) codificantes da toxina citoletal distensiva pela multiplex-PCR, sendo três estirpes provenientes de hipermercados e uma de feira livre. Observou-se a presença de estirpes virulentas de C. jejuni, portadoras do complexo de genes cdt, nas amostras de frango resfriado, não só na linha de abate, mas até o ponto final da cadeia de distribuição, nos dois principais centros de venda a varejo.

Eighty samples of refrigerated broiler thighs purchased in street markets and supermarkets in the city of São Paulo, SP, were analyzed. Thirteen Campylobacter spp. strains were isolated in 10 (12.5%) thighs, five of them from street market samples and other five from supermarkets. Eleven strains were identified as Campylobacter jejuni and two of them as Campylobacter coli. The 11 strains were confirmed to be C. jejuni using PCR for hippuricase (hip) gene. From these, multiplex-PCR showed that four (36.4%) strains presented the three genes (cdtA, cdtB, and cdtC) encoding cytolethal distending toxin: three strains from supermarket and one from street market samples. These results are important, because they demonstrate the presence of virulent C. jejuni strains in refrigerated broiler thigh samples, not only in the slaughterhouse but in the final point of the distribution chain, at the two most important food retail commercer.

RESUMO Leptospiras excretadas pela urina podem sobreviver por longos períodos em águas de superfície e solos, na dependência do pH e teor de umidade e de matéria orgânica. Investigou-se a influência do meio ambiente na transmissão da leptospirose em dois rebanhos exclusivos de ovinos (A e C) e dois de ovinos consorciados com bovinos (F e H) da região de Sorocaba, SP, no período de dezembro de 2007 a setembro de 2008. Foram examinadas amostras de soro pela reação de soroaglutinação microscópica; de urina, água e solo pelo cultivo para leptospiras e urina de ovinos pela PCR. Condições edafoclimáticas, pH das águas de superfície e solo, granulometria e permeabilidade do solo foram analisadas. Todos os rebanhos apresentaram pelo menos um animal sororeagente para Leptospira spp. Apenas a PCR de um pool de urina de ovinos (H) foi positiva. Leptospira spp. foi isolada do lago de F. O pH das águas de superfície variou entre 6,0-7,0; e nos solos entre 4,5 e 6,8. Os índices de matéria orgânica em A, C e H variaram de 24 a 35 g/dm3, e 63 g/dm3 em F. A composição do solo de A e F mostrou-se franco-argiloarenosa, C argilosa e H franco-siltosa; como texturas mistas são capazes de manter a umidade, principalmente devido a argila. Diante da presença de animais sororeatores e portanto da circulação de Leptospira spp. nos rebanhos, conclui-se que o ciclo de transmissão é dependente da interação sinérgica e antagônica de muitas variáveis; onde o pastejo num habitat com alto teor de umidade parece ser limitante.

ABSTRACT Leptospires excreted by urine are able to survive for long periods in surface water and soil depending on the pH, humidity and organic matter presence. This paper reported the influence of environment conditions on the transmission of leptospirosis in two sheep-only farms (A and C) and two cattle-sheep farms (F and H) from December 2007 to September 2008. Serum samples were examined by microscopic agglutination test; urine, surface water and soil samples were cultured for leptospires, and ovine urine pools were analyzed by PCR. Regional edaphoclimatic conditions, pH of surface water and soil, granulometry and permeability of soil were analyzed. All herds presented at least one reactor to Leptospira spp. Only the PCR of an ovine urine pool of herd H was positive and Leptospira spp. was isolated from the F lake. The pH of water samples ranged from 6.0 to 7.0; while in soil it was around from 4.5 to 6.8. Soil organic matter were 24 to 35 g/dm3 in A, C e H, and 63 g/dm3 in F. Soil samples of A and F showed loamy-clay texture; C had clay soil, and H loamy-silt soil; as mixed compositions are able to maintain the humidity, mainly where clay is present. As the presence of reactors in all herds indicated the contact with Leptospira spp., it was concluded that the cycle of transmission is dependent on the synergistic and antagonistic interaction of many variables; but the close contact of animals grazing in a high humidity habitat seems to be limiting.

The objectives of the present study were the subtyping of Campylobacter jejuni subsp. jejuni strains obtained from humans and different animal species using PCR-RFLP, and the detection, by means of the same technique, of strains related to serotype PEN O19:LIO 7, the main C. jejuni serotype linked to Guillain-Barré Syndrome (GBS). Seventy C. jejuni strains isolated from human feces (n=33), primates (n=15), dogs (n=5), swine (n=2), bovines (n=1), abortion material from goats (n=2) and poultry carcasses (n=12), all collected in the state of São Paulo, were subtyped by means of PCR-RFLP of fla A gene, using restriction endonucleases Hae III, Afa I and Mbo I. Seven subtypes were observed when using the enzyme Hae III; eight when using Mbo I; and seven when using Afa I. The combination of the three endonucleases led to 16 fla-RFLP subtypes, from which ten subtypes shared strains of human and animal origin. From these, seven subtypes were observed in human and broiler strains. In eight subtypes, the other animal species shared patterns with human strains. It was inferred that, besides broilers, swine, goats, dogs and primates may be sources of infection for human in São Paulo. PCR-RFLP is a highly discriminatory technique that may be applied to molecular epidemiology studies of samples from different origins. Besides, the study also enabled the detection of two human strains and two primate strains related to serotype PEN O19: LIO 7.

RESUMO Com o objetivo de determinar a prevalência de aglutininas anti-Leptospira spp., foi realizado um inquérito sorológico em 131 suínos abatidos no matadouro público de Patos, Estado da Paraíba, Brasil. Para o diagnóstico sorológico de leptospirose, foi utilizada a técnica de soroaglutinação microscópica (SAM), utilizando-se culturas vivas de 22 sorovares patogênicos e dois sorovares saprófitos de Leptospira spp. Para a determinação do sorovar mais provável, foram considerados o título de aglutininas e a freqüência de soros reagentes. Soros que apresentaram títulos iguais para dois ou mais sorovares foram excluídos desta análise. Dos 131 suínos, 44 foram soropositivos para pelo menos um dos sorovares empregados, resultando em uma soroprevalência de 33,6% (IC 95% = 25,5% 42,4%). O sorovar mais provável foi o Pomona, com 38 (29,0%; IC 95% = 21,4% – 37,6%) soros reagentes. Também foram constatadas reações sorológicas para os seguintes sorovares: Pyrogenes (2,3%; IC 95% = 0,5% – 6,5%), Canicola (1,5%; IC 95% = 0,2% – 5,4%) e Shermani (0,8%; IC 95% = 0,02% – 4,2%). Houve diferença significativa na soroprevalência para o sorovar Pomona em relação aos demais sorovares (P < 0,0001).

ABSTRACT A serologic survey was conducted among 131 swine slaughtered in the public slaughterhouse of Patos city, Northeast region of Brazil, to determine the prevalence of anti-Leptospira spp. agglutinins. For serologic diagnosis of leptospirosis, the microscopic agglutination test (MAT) was carried out using live cultures of 22 pathogenic and two saprophytic Leptospira spp. serovars. The most frequent serovar was found crossing the results of frequency and titer of agglutinins, and sera presenting equal titers for two or more serovars were not considered for this analysis. Of the 131 swine analyzed, 44 were seropositive for at least one Leptospira spp. serovar, resulting in a seroprevalence of 33.6% (95% CI = 25.5% 42.4%). The most frequent serovar was Pomona, with 38 (29.0%; 95% CI = 21.4% 37.6%) reactant sera. Other reactant serovars and respective prevalence were: Pyrogenes (2.3%; 95% CI = 0.5% 6.5%), Canicola (1.5%; 95% CI = 0.2% 5.4%) and Shermani (0.8%; 95% CI = 0.02% 4.2%). There was statistical difference in seroprevalence to serovar Pomona compared with others reactant serovars (P < 0.0001).

RESUMO O presente estudo teve como objetivo determinar a soroprevalência da leptospirose bovina em fêmeas em idade reprodutiva do Estado de São Paulo, estratificado em sete regiões produtoras. Foram utilizados o delineamento estatístico, as amostras sorológicas e as informações contidas nos questionários empregados no Programa Nacional de Controle e Erradicação da Brucelose e Tuberculose (PNCETB), instituído pelo Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento, considerando-se a utilização de fêmeas bovinas com idade ‡ a 24 meses (excluindo-se machos), diferentes tipos de produção, práticas de manejo, finalidades de reprodução, tamanho dos rebanhos e sistema de comercialização. Realizou-se a Soroaglutinação Microscópica (SAM) em 8.216 amostras sorológicas de animais provenientes de 1.021 propriedades. De acordo com os resultados obtidos, a infecção por Leptospira spp. ocorre em todo o Estado de São Paulo, com soroprevalência de 49,4% (IC 95% = 44,4%-54,4%) nas fêmeas bovinas em idade reprodutiva e em 718 (71,3%; IC 95% = 68,5%-74%) das propriedades analisadas. O sorovar Hardjo (46%) e sua associação com o sorovar Wolffi (21%) foram prevalentes entre o total de animais sororeagentes, seguidos pelos sorovares Shermani (8,9%), Autumnalis (4,4%) e Grippotyphosa (3,9%). Leptospira spp. está distribuída por todo estado e independe do tipo de exploração, manejo e das práticas de reprodução adotadas nos rebanhos.

ABSTRACT The objective of the present study was to determine the seroprevalence of bovine leptopirosis in São Paulo State, stratified in seven cattle production regions. It was based on the statistic delineation, serological samples and responses to the survey employed in the National Program for Control and Eradication of Brucelosis and Tuberculosis established by Ministry of Agriculture (2001). From the herds selected, serological analysis was only conducted on the cows ‡ 24 months old (excluding the males). The study took into consideration the herd size, the type of productive exploration, the reproductive handling, bovine practices and the commercialization system. The microscopic agglutination test (MAT) was applied on 8,216 serum samples from 1,021 different farms. The results showed that leptospirose infection occurs all over the seven regions of São Paulo State with 49.4% (CI 95% = 44.4–54.4%) animal seroprevalence and in 718 (71.3%; CI 95% = 68.5–74.0%) of the herds analyzed. Hardjo (46%) was the prevalent serovar for all the animals examined, followed by the Hardjo/Wolffi association (21%), Shermani (8.9%), Autumnalis (4.4%) and Grippotyphosa (3.9%). Leptospira spp. is present in all regions of the State of São Paulo and its occurrence is independent of the handling conditions and reproductive practices adopted in the herds.

RESUMO O presente trabalho objetivou avaliar o efeito do tratamento com sulfato de estreptomicina sobre o perfil sorológico de um rebanho bovino acometido de um surto de leptospirose pelo sorovar Canicola e avaliar os parâmetros reprodutivos no ciclo reprodutivo subseqüente. Foram formados 2 grupos de 10 fêmeas bovinas: G1-tratado com sulfato de estreptomicina, 25 mg/kg/pv por 3 dias, via IM; G2 sem tratamento. Amostras de soro foram colhidas no início dos abortamentos e posteriormente a cada 15 ou 30 dias num total de 270 dias e examinadas pela reação de soroaglutinação microscópica-SAM. Vinte amostras de urina colhidas no início dos sintomas e 10 -15 dias após tratamento e seis fetos abortados (rins, fígado, pulmão e conteúdo abomasal) foram submetidos ao exame bacteriológico para pesquisa de bactérias causadoras de abortamento e à técnica de PCR para Leptospira spp. Ocorreu soroconversão predominante para Leptospira spp. sorovar Canicola (títulos: 100 a 51.200); 7/20 amostras de urina foram positivas para Leptospira spp. na PCR, sendo todas negativas no exame bacteriológico e nenhuma amostra fetal foi positiva em ambas as técnicas. Os abortamentos cessaram após a antibioticoterapia, e as amostras de urina negativaram-se na PCR. O sulfato de estreptomicina foi eficaz na eliminação da doença, entretanto, não influenciou a evolução dos títulos de anticorpos no perfil sorológico quando comparado ao grupo controle, ambos negativando-se ao redor de 200 dias após o início dos sintomas. Embora não houvesse diferença estatística entre as taxas de prenhez/IA e parto/prenhez do grupo tratado em relação ao não tratado (p > 0,05), talvez devido ao baixo número amostrado, as taxas reprodutivas foram menores no grupo não tratado.

ABSTRACT The objectives of the present trial were to evaluate the reproductive parameters in a Holstein bovine herd affected by leptospirosis during the outbreak of abortion and stillborn fetus and treated with streptomycin sulfate. Animals were divided in 2 groups of 10 cows each: G1, treated with streptomycin sulfate 25 mg/kg/lw for 3 days by IM route; and; G2, untreated control. Serum samples were collected on the onset of abortions and after that every 15 or 30 days until completing 270 days. Samples were analyzed by means of MAT microscopic agglutination test that showed sera conversion to serovar Canicola with titers ranging from 100 to 51,200; 7/20 of the urine samples were positive for Leptospira spp. by PCR After streptomycin sulfate therapy, the outbreak ended and urine samples also got negative to PCR and no fetus samples were positive in either techniques. However, it did not influence the evolution in antibody titers of serological profiles in both groups, which got negative after around 200 days of the onset of symptoms. Although there was no significant difference of the frequency of pregnancy/AI and calving/pregnancy rates between treated and untreated groups (p > 0.05), reproductive rates were lower in the untreated group.

Samples of 114 bovine fetuses and 10 calves, which dead in perinatal period, were examined for detection of DNA. The most common detected agent was Brucella spp. in 17 samples (13.7%) followed by Leptospira spp. in 4 cases (3.2%),bovine herpesvirus (BHV) and bovine viral diarrhea (BVDV) in 3 animals (2.4%) each, and 1 for the association of BVDV and BHV. In 77.4 % (96/124) of the samples it was not possible to detect any agent.

RESUMO Com o objetivo de aprimorar os métodos diagnósticos em micoplasmoses foi realizado um estudo utilizando-se muco prepucial e sêmen innatura de touros de monta natural e de uma central de inseminação artificial com o objetivo de reduzir o tempo necessário para a emissão de resultados e aumentar os níveis de detecção, assumindo o isolamento bacteriano, técnica dependente da viabilidade microbiana, como teste gold standard. Cento e setenta e cinco amostras de muco prepucial e 143 amostras de sêmen fresco foram estudadas. Através da técnica de PCR (Reação da Polimerase em Cadeia), uma triagem prévia das amostras foi realizada para detecção de Mollicutes, utilizando-se o sistema MGSP/GPO-1. Primers espécie-específicos para Mycoplasma bovigenitalium e Ureaplasma diversum foram posteriormente utilizados. Ao isolamento, foram observados 45,1% (79/175) de positivos para Mollicutes e 66,5% (115/173) para U. diversum em muco de prepucial. Comparativamente, a PCR revelou 63,7% (109/171) de amostras positivas através de sistema de MGSP/GPO-1, 42,6% (72/169) de amostras positivas para M. bovigenitalium e 72,9% (124/170) para U. diversum. O estudo das amostras de sêmen apresentou 22,5% (32/142) de positivos para Mollicutes e 51,7% (74/143) para U. diversum, através do isolamento. Pela PCR, foram detectadas 24,1% (33/137) de amostras positivas no sistema MGSP/GPO-1, 27,4% (34/124) de amostras positivas para M. bovigenitalium e 56,6% (73/129) para U. diversum. O teste de McNemar para presença de Mollicutes em muco de prepucial (p = 0,57), mostrou que o sistema MGSP/GPO-1 pode ter um valor considerável quando associado à detecção específica de U. diversum, apresentando uma boa sensibilidade (75,2%), porém baixa especificidade (58,9%). A análise estatística mostrou que o sistema MGSP/GPO-1 de triagem poderia substituir o isolamento preliminar para Mycoplasma spp. em amostras de sêmen (p = 0,86).

ABSTRACT With the objective of improving the diagnostic methods in mycoplasmosis, a study was carried out using bovine prepucial mucus and fresh semen from natural breeding and one Artificial Insemination Center with the aim to reduce the time necessary for the emission of results and to increase the detection levels, assuming bacterial isolation, on technique that depends on microbial viability, as the gold standard test. One hundred and seventy-five prepucial mucus samples and 143 fresh semen samples were studied. By PCR (Polymerase Chain Reaction) technique, a previous screening using the MGSP/GPO-1 system was tested for Mollicutes detection. Species-specific primers for Mycoplasma bovigenitalium and Ureaplasma diversumwere used subsequently. By isolation there were observed 45.1% (79/175) of positivity for Mollicutes and 66.5% (115/173) for U. diversum in prepucial mucus. Comparatively, PCR revealed 63.7% (109/171) of positive samples by MGSP/GPO-1, 42.6% (72/169) of positive samples for M. bovigenitalium and 72.9% (124/170) for U. diversum. The semen samples study presented 22.5% (32/142) of positivity for Mollicutes and 51.7% (74/143) for U. diversum, by isolation. By PCR, 24.1% of positive samples were detected (33/137) using the MGSP/GPO-1 system, 27.4% (34/124) of positive samples for M. bovigenitalium and 56.6% (73/129) for U. diversum. The McNemar test for the Mollicutes presence in prepucial mucus (p = 0.57) showed that theMGSP/GPO-1 system can have a considerable value when associated with specific detection of U. diversum, showing good sensitivity (75.2%), however lower specificity (58.9%). The statistical analysis showed that the screening by MGSP/GPO-1 system could substitute the preliminary isolation of Mycoplasma spp. in semen samples (p = 0.86).